實(shi)時熒(ying)光定(ding)量PCR的(de)方(fang)法(fa)

實(shi)時熒(ying)光定(ding)量PCR技(ji)術(shu)，是(shi)指(zhi)在(zai)PCR反應體系(xi)中(zhong)加(jia)入熒光(guang)基團(tuan)，利用(yong)熒(ying)光信(xin)號積(ji)累實(shi)時監(jian)測整個PCR進程，後(hou)通(tong)過(guo)標(biao)準曲線對未(wei)知模(mo)板(ban)進行定(ding)量分(fen)析(xi)的(de)方(fang)法(fa)。實(shi)時熒(ying)光定(ding)量PCR的(de)方(fang)法(fa)有(you)實(shi)時熒(ying)光PCR壹(yi)步(bu)法(fa)與(yu)實(shi)時熒(ying)光PCR兩(liang)步(bu)法(fa)。壹(yi)步(bu)法(fa)與(yu)兩(liang)步(bu)法(fa)有(you)什(shen)麽區(qu)別(bie)呢(ne)？壹(yi)步(bu)法(fa)為反(fan)轉(zhuan)錄(lu)和(he)PCR擴增在(zai)同壹(yi)個管(guan)內(nei)完成。兩(liang)步(bu)法(fa)為反(fan)轉(zhuan)錄(lu)和(he)PCR擴增分兩步(bu)進行，先從RAN模板(ban)反轉(zhuan)錄(lu)得(de)到(dao)cDNA，得到的(de)cDNA在(zai)進行壹(yi)次(ci)或(huo)多次不同的(de)PCR反(fan)應(ying)。壹(yi)步(bu)法(fa)與(yu)兩(liang)步(bu)法(fa)有(you)那些(xie)優(you)點呢(ne)？壹(yi)步(bu)法(fa): 快(kuai)速, 簡(jian)便(bian), 敏感, 減(jian)少汙(wu)染(ran)機(ji)會, 減少了RNA 二(er)級(ji)結(jie)構, 聚合(he)酶具(ju)有(you)校正活性(xing), 減(jian)少PCR 反(fan)應(ying)的(de)錯配(pei)率(lv)。兩(liang)步(bu)法(fa): 同(tong)壹(yi)管(guan)中同時擴增兩個引(yin)物, 減少了壹(yi)些(xie)人(ren)為的(de)誤(wu)差(cha); 將RNA 轉錄(lu)為cDNA, 易於保存，把(ba)反(fan)轉(zhuan)錄(lu)體(ti)系(xi)分開做(zuo)，壹(yi)次(ci)的轉錄(lu)產物(wu)可以(yi)多次用(yong)來(lai)做PCR，非常適(shi)用(yong)於摸(mo)索(suo)PCR條件。;兩(liang)步(bu)法(fa)整(zheng)個過(guo)程(cheng)比壹(yi)步(bu)法(fa)的(de)費用(yong)少。壹(yi)步(bu)法(fa)和(he)兩(liang)步(bu)法(fa)各(ge)有其特點，要按照(zhao)試(shi)驗(yan)的對象具(ju)體(ti)確定(ding)用(yong)那壹(yi)種方(fang)法(fa)，對不適(shi)合(he)於提(ti)取mRNA的(de)樣(yang)品只(zhi)能(neng)用(yong)壹(yi)步(bu)法(fa)RT-PCR方(fang)法(fa)。熒(ying)光(guang)PCR凍(dong)幹(gan)設備(bei)技術(shu)要點：1.無(wu)外(wai)界幹(gan)擾熱量。2.內(nei)部溫度(du)均壹(yi)。3.極(ji)限(xian)真(zhen)空(kong)度(du)好。4.設備(bei)過(guo)程(cheng)控制(zhi)能(neng)力(li)強。試劑(ji)凍(dong)幹(gan)機(ji)Pilot5-8T涉及產品有(you)熒(ying)光PCR、免疫(yi)微(wei)球、化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)、基因芯片(pian)、量子(zi)點、ELISA、膠(jiao)體金(jin)、POCT、IVD校(xiao)準品質(zhi)控品校(xiao)準(zhun)品、內(nei)毒(du)素(su)檢測試劑(ji)、血清、白(bai)蛋(dan)白、幹(gan)細胞及相應(ying)提取物(wu)等(deng)。