實(shi)時熒(ying)光定量(liang)PCR標準品(pin)稀釋(shi)法

實(shi)時熒(ying)光定量(liang)PCR是在(zai)常規PCR基礎上加(jia)入(ru)熒(ying)光標記探針或(huo)相應(ying)的熒(ying)光染(ran)料(liao)，利(li)用(yong)熒光信號積累(lei)對PCR反(fan)應(ying)的過(guo)程(cheng)，進(jin)行(xing)實(shi)時監控實現起(qi)始模板的準確(que)定量(liang)。實(shi)時熒(ying)光定量(liang)PCR標準品(pin)梯(ti)度(du)稀釋(shi)方(fang)法依(yi)次是選(xuan)擇(ze)目標、提取/PCR、純(chun)化(hua)、測試(shi)濃(nong)度(du)、調(tiao)整濃度(du)、梯(ti)度(du)稀釋(shi)。壹般CT值(zhi)在(zai)18-30之(zhi)間，覆蓋(gai)全部(bu)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)區(qu)間。和大(da)家(jia)在(zai)分享壹下(xia)10倍(bei)連續(xu)梯(ti)度(du)稀釋(shi)方(fang)法：1V原(yuan)液（標準品(pin)為i）+9V稀釋(shi)緩(huan)沖液，得到(dao)標準品(pin)為ii。1V標準品(pin)ii+9V稀釋(shi)緩(huan)沖液，得到(dao)標準品(pin)為iii, 1V標準品(pin)iii+9V稀釋(shi)緩(huan)沖液，得到(dao)標準品(pin)為iv, 1V標準品(pin)iv+9V稀釋(shi)緩(huan)沖液v,切不(bu)可用(yong)標準品(pin)i分(fen)別加(jia)不(bu)同體(ti)積的(de)稀釋(shi)緩(huan)沖液直接得(de)到(dao)標準品(pin)ii、iii、iv、v，標準品(pin)要復(fu)管做測試(shi)，復(fu)管次數要遵循(xun)統(tong)計(ji)學(xue)要求。熒光PCR凍(dong)幹(gan)時，制(zhi)品(pin)溶(rong)液厚度(du)不(bu)宜(yi)過(guo)厚(hou)。壹般應(ying)為10-15mm，制(zhi)品(pin)過(guo)厚的(de)情(qing)形類似(si)於(yu)濃度(du)過(guo)高時的(de)情(qing)況(kuang)，不(bu)僅幹(gan)燥(zao)的(de)時間更長，塌(ta)陷(xian)、結(jie)塊(kuai)。凍(dong)幹(gan)機(ji)Pilot3-6T醫(yi)療(liao)應(ying)用(yong)涉及產品(pin)有(you)：熒光PCR、免(mian)疫(yi)微球(qiu)、化(hua)學發光、基因(yin)芯片(pian)、量(liang)子(zi)點(dian)、ELISA、膠(jiao)體(ti)金、POCT、IVD校(xiao)準品(pin)質(zhi)控品校(xiao)準品(pin)、內毒(du)素檢(jian)測試(shi)劑(ji)、血(xue)清(qing)、白(bai)蛋(dan)白(bai)、幹細胞(bao)及相應(ying)提取物(wu)等。